水是實驗室內(nèi)一個常常被忽視但至關(guān)重要的試劑。實驗室用水有那些種類?能達(dá)到什么級別?不同實驗對水的要求有那些?
實驗室常見的水的種類:
1、蒸餾水(Distilled Water ):
實驗室最常用的一種純水,雖設(shè)備便宜,但極其耗能和費水且速度慢,應(yīng)用會逐漸減少。蒸餾水能去除自來水內(nèi)大部分的污染物,但揮發(fā)性的雜質(zhì)無法去除,如二氧化碳、氨、二氧化硅以及一些有機(jī)物。新鮮的蒸餾水是無菌的,但儲存后細(xì)菌易繁殖;此外,儲存的容器也很講究,若是非惰性的物質(zhì),離子和容器的塑形物質(zhì)會析出造成二次污染。
2、去離子水(Deionized Water ):
應(yīng)用離子交換樹脂去除水中的陰離子和陽離子,但水中仍然存在可溶性的有機(jī)物,可以污染離子交換柱從而降低其功效,去離子水存放后也容易引起細(xì)菌的繁殖。
3、反滲水(Reverse osmosis Water):
其生成的原理是水分子在壓力的作用下,通過反滲透膜成為純水,水中的雜質(zhì)被反滲透膜截留排出。反滲水克服了蒸餾水和去離子水的許多缺點,利用反滲透技術(shù)可以有效的去除水中的溶解鹽、膠體,細(xì)菌、病毒、細(xì)菌內(nèi)毒素和大部分有機(jī)物等雜質(zhì),但不同廠家生產(chǎn)的反滲透膜對反滲水的質(zhì)量影響很大。
4、超純水(Ultra-pure grade water):
其標(biāo)準(zhǔn)是水電阻率為18.2MΩ-cm。但超純水在TOC、細(xì)菌、內(nèi)毒素等指標(biāo)方面并不相同,要根據(jù)實驗的要求來確定,如細(xì)胞培養(yǎng)則對細(xì)菌和內(nèi)毒素有要求,而HPLC則要求TOC低。
評價水質(zhì)的常用指標(biāo):
1、電阻率(electrical resistivity):
衡量實驗室用水導(dǎo)電性能的指標(biāo),單位為MΩ-cm,隨著水內(nèi)無機(jī)離子的減少電阻加大則數(shù)值逐漸變大,實驗室超純水的標(biāo)準(zhǔn):電阻率為18.2MΩ-cm。
2、總有機(jī)碳(Total Organic Carbon ,TOC):
水中碳的的濃度,反映水中氧化的有機(jī)化合物的含量,單位為ppm 或 ppb。
3、內(nèi)毒素(Endotoxin):
革蘭氏陰性細(xì)菌的脂多糖細(xì)胞壁碎片,又稱之為"熱原",單位cuf/ml
水的基本性質(zhì):1個水分子(H2O)是由1個氧原子和2個氫原子彎曲鍵結(jié)而成。由于正、負(fù)電荷的中心不一致,因此屬于極性分子。當(dāng)2個水分子同時存在時,二者會由靜電交互作用與氫鍵結(jié)合,互相吸引并保持一定的距離。而1個水分子可以同時與4個水分子結(jié)合,形成晶體般的整齊結(jié)構(gòu)。
水分子聚合體中,由于氫鍵鍵結(jié)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)會部分?jǐn)嗔?,而形成逐次移動變化的狀態(tài),因此水在整體上呈現(xiàn)液態(tài),而此結(jié)構(gòu)變化每秒可達(dá)1012次。
一般而言,水若含有適量的鈉、鉀離子及硅酸鹽等礦物質(zhì),就會覺得好喝,若含有大量殘留的鹽類,如鎂、鈣等非酸堿中性鹽類,就會覺得難喝。也就是說,所謂的水除了H2O外,還含有許多其它的成分,而這些成分的種類和含量決定了水的味道。
水極易溶解鹽類,即使陰陽離子經(jīng)由靜電的交互作用,很強的結(jié)合在一起,在水中也很容易電解。這是因為,水分子可以和離子結(jié)合產(chǎn)生“水合離子”。離子的半徑很小,電荷大的離子會與水分子強力的交互作用,由水分子在離子的周圍緊密排列。這時候,陽離子會與帶負(fù)極矩的氧原子相互作用,而陰離子則形成相反的結(jié)構(gòu)。
水中存在的雜質(zhì)
可溶性無機(jī)物:無機(jī)鹽類、溶解氣體、重金屬、硬度成分(鈣、鎂等)
可溶性有機(jī)物:木質(zhì)素、單寧、腐植酸、內(nèi)毒素、RNA分解酶、農(nóng)藥、三氯甲烷、環(huán)境荷爾蒙物質(zhì)、界面活性劑、有機(jī)溶劑
微粒子:鐵銹、膠體、懸浮物、固體顆粒
微生物:細(xì)菌類、藻類
實驗用水所要求的純度
所謂實驗,是指對現(xiàn)象所推測的假設(shè)加以驗證的動作。假設(shè)能否被證明為真理,與假設(shè)能否具有再現(xiàn)性的結(jié)果至關(guān)重要。實驗的再現(xiàn)性除了要有良好的技巧,還受到所用化學(xué)試劑的純度和分析儀器的精密度的影響。實驗中用來配置溶液的化學(xué)試劑,及所使用的水的純度也非常重要。假設(shè)水中污染物對實驗檢測會造成影響,就必須去除這些物質(zhì)。此外,為了取得良好的再現(xiàn)性結(jié)果,使用能保持穩(wěn)定水質(zhì)的純水是必要的。
隨著實驗用的分析系統(tǒng)靈敏度的提高,對水的純度有了更高的要求。
1ppm=1mg/L
1ppb=1μg/L
1ppt=1ng/L=1μg/ml
在水中,將距離1cm的兩片表面積為1cm2大小的電極加以通電,來監(jiān)測兩極間的導(dǎo)電率,通過所加電壓和測得的電流能夠獲知兩極間的電阻值,這個數(shù)值在水質(zhì)分析中通常被稱為電阻率或比電阻,其單位用MΩ.cm來表示。電阻率的倒數(shù)稱為導(dǎo)電率或電導(dǎo)率,用μs/cm來表示。
這兩個參數(shù)是表示水的純度的最常用參數(shù)。
將自來水中的離子去除,會使得電阻率值升高(導(dǎo)電率降低),單并非無限制的增加,這是因為部分水分子會電離為氫離子和氫氧根離子,其電阻率值極限值18.248MΩ.cm(25℃)。此外,電阻率值會隨著水的電離常數(shù)而改變,因而會受到水溫的影響。例如,25℃的超純水,其電阻值為18.2MΩ.cm,但在0℃則為84.2MΩ.cm,100℃則為1.3MΩ.cm。在25℃附近,當(dāng)溫度上升1℃,其電阻值將下降0.84MΩ.cm。因此,多使用補償至25℃的電阻率值來做衡量標(biāo)準(zhǔn)。
此外像總有機(jī)碳含量(TOC),熱源內(nèi)毒素含量,細(xì)菌含量,顆粒含量,微生物含量,總?cè)芙夤腆w含量(TDS)等也常常被用作補充說明水質(zhì)的重要參數(shù)。因此,水的純度標(biāo)準(zhǔn)通常由以上這些參數(shù)的一項或幾項來綜合說明、分級。
純水的分級標(biāo)準(zhǔn)
實驗室純水可分為4個常規(guī)等級:純水、去離子水、實驗室Ⅱ級純水和超純水
純水:純化水平最低,通常電導(dǎo)率在1-50μs/cm之間。它可經(jīng)由單一弱堿性陰離子交換樹脂、反滲透或單次蒸餾制成。典型的應(yīng)用包括玻璃器皿的清洗、高壓滅菌器、恒溫恒濕實驗箱和清洗機(jī)用水。
去離子水:電導(dǎo)率通常在1.0-0.1μs/cm之間。通過采用含強陰離子交換樹脂的混床離子交換制成,但它有相對較高的有機(jī)物和細(xì)菌污染水平,能滿足多種需求,如清洗、制備分析標(biāo)準(zhǔn)樣、制備試劑和稀釋樣品等。
實驗室Ⅱ級純水:電導(dǎo)率<1.0μs/cm,總有機(jī)碳(TOC)含量小于50ppb以及細(xì)菌含量低于1CFU/ml。其水質(zhì)可適用于多種需求,從試劑制備和溶液稀釋,到為細(xì)胞培養(yǎng)配備營養(yǎng)液和微生物研究。這種純水可雙蒸而成,或整合RO和離子交換/EDI多種技術(shù)制成,也可以再結(jié)合吸附介質(zhì)和UV燈。
超純水:這種級別的純水在電阻率、有機(jī)物含量、顆粒和細(xì)菌含量方面接近理論上的純度極限,通過離子交換、RO膜或蒸餾手段預(yù)純化,再經(jīng)過核子級離子交換精純化得到超純水。通常超純水的電阻率可達(dá)18.2MΩ-cm,TOC<10ppb,濾除0.1μm甚至更小的顆粒,細(xì)菌含量低于1CFU/ml。超純水適合多種精密分析實驗的需求,如高效液相色譜(HPLC),離子色譜(IC)和離子捕獲-質(zhì)譜(ICP-MS)。少熱源超純水適用于像真核細(xì)胞培養(yǎng)等生物應(yīng)用,超濾技術(shù)通常用于去除大分子生物活性物質(zhì),如熱源(結(jié)果為<0.005IU/ml)以及無法檢測到的核酸酶和蛋白酶。
目前世界上比較通用的純水標(biāo)準(zhǔn)主要有以下幾個:國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO),美國臨床病理學(xué)會(CAP)試藥級用水標(biāo)準(zhǔn),美國測試和材料實驗社團(tuán)組織(ASTM),臨床試驗標(biāo)準(zhǔn)國際委員會(NCCLS),美國藥學(xué)會(USP)等。同時,我國也有相應(yīng)的純水標(biāo)準(zhǔn):中國國家電子級超純水規(guī)格GB/T11446-1997和中國國家實驗室用水規(guī)格GB6682-92等。因此市面上絕大多數(shù)的純水系統(tǒng),無論是進(jìn)口的還是國產(chǎn)的,都是依據(jù)這些標(biāo)準(zhǔn)來設(shè)計流程的。